アミノ酸分析・定量受託サービス

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目次

• 概要
• 特長
• 種類と料金
• 詳細
• 技術基盤
• サンプルの取り扱い

アミノ酸分析受託サービスの概要

アミノ酸分析は、分子構造内に第1級または第2級アミノ基を持つ化合物を含有するタンパク質、ペプチド、他の薬学的または生物学的調製物や試料のアミノ酸組成や含有量の決定に使用される基本的な生化学技術です。アミノ酸分析は、遊離アミノ酸や、ペプチド、タンパク質、糖タンパク質などの巨大分子から放出されるアミノ酸の定量・同定を可能にします。また、タンパク質複合体やタンパク質粉末などのタンパク質混合物の分析も可能にします。

ところで、タンパク質は哺乳類に豊富に存在し、哺乳類の食餌・代謝における重要かつ生命維持に必須な要素です。細胞を修復し、新しい細胞を合成するのを助けるためにタンパク質および種々のアミノ酸がヒトの食餌に必要とされますから、尿、血液、血漿などの体液中の遊離アミノ酸の含有量を分析するアミノ酸の定量により代謝状態を観察・発見できます。

Bio-Synthesis社はGLPガイドラインに従い、生物学的化合物、食品、組織、体液、薬物サンプルに関する包括的なアミノ酸分析とアミノ酸定量サービスを提供します。UV分光光度法を使用して、特定のサンプルのタンパク質、ペプチド、およびアミノ酸の正確なデータを得ることができます。タンパク質分析、濃度、含量、モル比、および吸光係数はすべて、同社のアミノ酸分析サービスを使用して決定することができます。

アミノ酸分析サービスの特長

• 低マイクログラムのスケールまでに高感度
• 全20種類の天然アミノ酸の試験
• 5-7日以内に配信される包括的なレポート
• 非標準アミノ酸の分析

アミノ酸分析サービスの種類

料金についてはお問い合わせください。

アミノ酸分析サービスの詳細

アミノ酸の微量分析 | 体液の生理学分析 | 食品含有物分析

◆アミノ酸の微量分析

• アミノ酸プロファイル (トリプトファンは含まず)
• 標準タンパク質およびペプチド加水分解
• システイン測定 (PAO)
• アミノ糖
• 他の特定アミノ酸の定量

◆体液の生理学分析

• 血漿、遊離型アミノ酸
• 尿、遊離型アミノ酸
• 脳脊髄液および他の生体液

◆食品含有物分析

• 完全なアミノ酸プロファイル
• トリプトファンを含まないアミノ酸プロファイル
• システイン、メチオニンおよびリシン+9
• 標準タンパク質加水分解物
• メチオニン、リジンまたはヒドロキシプロリン
• システインとメチオニン
• ヒドロキシプロリンのアミノ酸分析
• 遊離サプリメントアミノ酸
• 完全なサプリメントアミノ酸プロファイル
• 利用可能なリジンおよび完全なアミノ酸プロファイル
• グルタミン (ペプチドおよびタンパク質)
• HMB-メチオニン類似体

技術基盤

• 使用機器:
  Waters Breeze™2 HPLCシステム、Waters 1525 Binary HPLCポンプ、Waters 2475 Multi λ Fluorescence検出器、Waters 717 plus Autosamplerインジェクタ
• このシステムは、蛍光検出によって逆相クロマトグラフィーを行います。クロマトグラフィーの前に、水溶液下でAccQ•Tag (6-アミノキノリル-N-ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート)化学を用いてアミノ基のプレカラム誘導体化を行います。
• アミノ酸は、6-アミノキノリル-N-ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート (AQC)で誘導体化されます。分析物のプレカラム誘導体化に続いて、逆相カラムおよび多波長蛍光検出器を用いて分離および検出がなされます。この分析により、最大42のアミノ酸および関連化合物の同定および定量が可能になります。レポートは事前に定義されたソフトウェアテンプレートを使用して生成されます。
• 化学:
  Waters社AccQ•Tagのアミノ酸分析システムが誘導体化に使用されます。
• 知的財産:
  配列データと関連知的財産への権利はすべてお客様に帰属します。

サンプル調製と送付方法について

サンプル状態 | サンプル量 | ガイドライン | 純度 | コンタミ | 定量向けサンプル | 送付方法

サンプルをお送り頂く前に、お気軽にお問い合わせください。最も効率的で費用対効果の高い分析方法を確実に採用頂くことができます。サンプルのご提出フォームとガイドラインを各サンプルに添付してください。

◆サンプル状態

• Dry, In solution, PVDF membrane

最良の結果を得るには、MilliQ水、PBS、リン酸緩衝液で、または10×75mmの無色パイレックスチューブで乾燥した状態でサンプルをお送り頂く必要があります。タンパク質が容易に溶解しない場合は、定量に大きな影響を与える可能性があるので、ご報告ください。

◆サンプル量

• Dry protein/peptide samples
  定量のために、Bio-Synthesisでは、約0.5〜2μg/μlの濃度で3つの10μgサンプル (合計30μg)をお客様にご提出頂くことを推奨しています。これは正確なピペッティングとサンプルへのバッファの最小限の使用に理想的です。これは必ずしも可能ではありませんので、あくまでもガイドラインです。ご用意できるサンプル量が5μg以下の場合は、お問い合わせください。同社の蛍光検出器はピコモールレベルの感度がありますが、低サンプル量ではバックグラウンド汚染が顕著になり、データの解釈が困難になります。

◆ガイドライン

1. 分子量1000〜25,000 Dalの場合: 〜5.0μg (> 50 pmol)
   分子量1000未満の場合: 〜1.0μg (〜1,000 pmol)
   のタンパク質サンプル。
2. エレクトロブロットされたサンプル
   PVDFに吸着させたタンパク質の分析は、結果が異なる場合があります。分析の質に影響を与えるいくつかの要因の中で、タンパク質の「濃度」が最も重要です。サンプルは1μg以上で、ポリフッ化ビニリデン (PVDF)でブロッティングすることを推奨します。ニトロセルロースおよびナイロンメンブレンはお勧めしません。最良の結果を得るためには、エレクトロブロッティングをトリスやグリシン非含有バッファー中で行うことが推奨されます。クマシーブリリアントブルーR-250またはポンソーSで、エレクトロブロッティングされたタンパク質を染色し、カミソリで膜から試料を切り出し、可能であれば清浄なエッペンドルフ型チューブ内でHPLCグレードの水を用い、ボルテックスすることにより徹底的に洗浄します。PVDFメンブレンには多数の汚染物質が含まれているため、対照サンプルとして、染色/脱染PVDFメンブレンのブランクピースをご供給頂くことをお勧めします。ブロッティングまたは染色プロトコルをご参照ください。トリプトファンおよびシステインについては直接的に定量することはできないことにご留意ください。液体形態で提出された試料については、トリプトファンおよびシステインのアミノ酸量を得ることができます。
3. 固形サンプル
   固形サンプルは直接、塩酸加水分解することができます。最良の結果を得るには、均質な加水分解を保証するためにサンプルを細かく粉砕することが推奨されます。
4. 遊離形態のアミノ酸
   遊離形態のアミノ酸を定量することができます。このタイプのアミノ酸でご提示頂くマトリックスには、大量のタンパク質、脂質、および炭水化物が含まれていないことを確認してください。このアッセイは、分子量5000-6000のカットオフフィルターを通して回転した血清で良好に機能します。日常的に分析される遊離形態のアミノ酸の例は、グルタミン、アスパラギン、シトルリン、B-アラニン、タウリン、トリプトファン、およびオルニチンです。

◆サンプルの純度

アミノ酸分析は、正確な組成および定量的データ分析のために、適切な量の精製サンプルを必要とします。精製はサンプルの汚染や減少の原因となる可能性があるため、清潔な環境を維持することが重要です。

◆アミノ酸サンプルの汚染を減らすためのポイント

1. タンパク質、ペプチド、および遊離型アミノ酸を含有するほとんどの試料を分析することができます。
2. バッファー、微量金属、界面活性剤、高塩類の存在をお避けください。塩はサンプルのpHを変えることができ、誘導体化を不完全、あるいは不成功のいずれかにします。推奨される塩濃度は0.1M以下です。
3. カルバメートと反応す​​る可能性があるため、アミノ含有物質の存在をお避けください。
4. Tris、HEPES、グリセロール (5%超)、脂質および炭水化物の有意なレベルは問題となり得ます。サンプルの洗浄が困難な場合は、沈殿や逆相HPLCでのクリーンアップなどの他の脱塩方法をお試しください。
5. 指紋やほこりなどによるサンプル汚染をお避けください。それらは多量のヒトタンパク質を含まれているため、結果が不明瞭になります。
6. 低分子量の溶質は、透析 (十分量のタンパク質がある場合)、逆相HPLC、またはProSorbフィルター (Thermo)にロードし、PVDF膜を0.1%TFAでよく洗浄することによって除去することができます。

定量向けサンプルについて

◆高感度アミノ酸分析

溶液中で純粋なタンパク質をご供給されるのがよい方法です。上記の条件にご注意頂き、ご提出サンプルの概算ピコモルについての情報をご提供頂き、内部標準の追加が決定できるようにしてください。

◆定量的アミノ酸分析

食品、タンパク質、合成ペプチドなどの乾燥サンプルを正確な重量で十分な量をご供給されるのがよい方法です。食品の場合は少なくとも100mgが必要であり、合成ペプチドまたはタンパク質サンプルでは数ミリグラムが必要です。

◆定量に関してご注意

• PVDFからの分析は定量的ではありませんが、存在するタンパク質の量の推定値を提供することは可能です。
• 酸加水分解は、それぞれアスパラギンおよびグルタミンをアスパラギン酸およびグルタミン酸に変換します。すなわち、Aspのアミノ酸分析結果はAsp + Asnの合計となり、Gluの結果はGlu + Glnとなります。
• ヒドロキシプロリン、タウリン、ノルロイシン、ヒドロキシリジンなどの異常なアミノ酸の場合は、お問い合わせください。

病原性について

生物サンプルには、潜在的な病原性または病原体のない状態と明記頂けますようお願い致します。

サンプルのご送付とご注文方法

◆サンプルの保存

• 運送時の安定性を確保するために、タンパク質を凍結乾燥またはスピードバックして固体サンプルにします。サンプルをエッペンドルフに保管してください。安全ロックチューブは、運送中の影響からクッションされています。ガスケット付きチューブを使用できない場合は、Parafilmを使用してキャップが出荷時に飛び出さないようにしてください。サンプルの冷却については、お客様でご判断ください。可溶性が問題にならない限り、試料の生物学的活性または構造的完全性を保存する必要はありません。乾燥サンプルとPVDF上のサンプルは、冷たく保つ必要はありません。
• あるいは、液体サンプルを冷蔵輸送する場合は+ 4℃に冷蔵してください。

◆サンプルの送付

サンプルのご送付前に、出来ましたらこちらのアミノ酸分析の申込書を使用して、タンパク質サンプルについてお知らせください。同時に、コピーをサンプルに添付いただけますと幸いです。

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