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目次
scFv/Fabの構築
Creative Biolabs社は、scFvおよびFab構築のための強固なプラットフォームを確立。
scFvまたはFabが特異的な抗原を標的とするための方法は3つあります。第1のアプローチは、マウスハイブリドーマクローンを作製し、次に完全IgG (またはIgM)をscFvまたはFabに変換する方法です。第2は、免疫されたファージディスプレイscFvまたはFabマウスライブラリーを作製し、次いでその抗原を用いてライブラリーをスクリーニングするというアプローチです。第3の方法は、scFvまたはFabクローンを直接得るべく、抗原を使用して既製のscFvまたはFab抗体ファージディスプレイライブラリー (通常はヒトの)をスクリーニングすることです。また、ニワトリIgYをscFvまたはFab断片に変換することもできます。
Fabフラグメントは可変ドメインおよび定常領域の両方を含むため、scFvとは異なり、その構築および最終的な発現はより複雑ですが、多くの実績を有するCreative Biolabs社により、scFv構築に使用される同じ重鎖および軽鎖可変鎖をFabの構築に使用することができます。
モノクローナル抗体が利用可能である場合、Fab断片は酵素的に作製することができます。
パパインは、ヒンジ部で免疫グロブリンG分子を切断するエンドペプチダーゼ活性を有するシステインプロテアーゼ酵素です。この切断により、3つの50kDa以下のフラグメント (2つのFabドメインと1つのFcドメイン)が生成されます。パパイン消化抗体は、凝集、沈殿、オプソニン化、および溶解を促進することができません。固定されたパパインは、消化後にパパイン酵素を除去する必要なしにFabおよびFcフラグメントを生成するという利点を有します。
Expression strategies:
- E. coliのペリプラズムにおける分泌発現。
- E. coliの細胞質における可溶性発現。
- 封入体としての不溶性発現。
- SUMOフュージョンプラットフォーム。
Purification strategies:
- アフィニティータグ：ヘキサヒスチジン (His6)タグ。
- 分子フォーマット：His6タグと目的タンパク質 (POI)との間にSUMOを挿入。
- 精製：IMAC (Immobilized Metal Affinity Chromatography 固定化金属アフィニティークロマトグラフィー)。
- 精製後のタグ除去：SUMOプロテアーゼを用いたSUMOのC末端での切断。
scFv構築の具体例
ハイブリドーマセルラインのシーケンシングから発現ベクター構築
scFv製造例 – ハイブリドーマセルラインのシーケンシングからの発現ベクターまで
以下の金額はすべて参考価格です。ライセンス事案の場合等、都度見積もりをお出しいたします。
- ハイブリドーマ細胞株からのVhおよびVl配列決定：35万円
- scFv発現コンストラクトの構築 (scFv抗体の発現ベクターを構築)：205,000円
以下のプロセスも含みます。- 遺伝子合成とコドン最適化には、VhとVlの2つの遺伝子があり、3,000円/ea、合計58,000円です。
- scFvコンストラクトの設計および構築：以下のように、1つのscFv抗体には2つの異なる方向があります。どちらがうまく機能するかを予測するのは困難です。1つのオリエンテーションがもはや機能しなくなっている可能性もあります。従って、両方のオリエンテーションを試すことを強くお勧めします。各オリエンテーション構成要素の価格は73,000円です。
- N’-Vh-linker-Vl-C’
- N’-Vl-linker-Vh-N’
- scFv構築物を発現ベクターにクローニング：DNAシーケンスによって遺伝子を検証します。80,000円/ea
以上、両方のscFv構成体を異なる向きで得たい場合、合計は350,000円です。遺伝子合成の請求は一度のみです。一つのscFvコンストラクトだけ必要な場合は、オリエンテーションを割り当ててください。価格は205,000円です。
scFv/Fab構築に関連するページ
- ファージディスプレイ関連ページ
- カスタム抗体作製受託サービス
下記リンク先はメーカーページです。
Services:
Thermal Stable scFv/Fab Screening
scFv/Fab Production
Fab PEGylation
Bivalent and Bispecific ScFv/Fab
Tandem scFv Bispecific Antibodies
Fab-scFv Fusion Protein (Tribody)
Products:
Fab Fragment Antibodies
scFv Fragment Antibodies
Bispecific Immune Cell Engagers