scFv / Fab構築

料金等、記載の金額は全て参考につき、詳細はお気軽にお問い合わせください。

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目次

概 要 具体例

Provided by Creative Biolabs社

scFv/Fab Construction

Creative Biolabs社は、scFvおよびFab構築のための強固なプラットフォームを確立。
scFvまたはFabが特異的な抗原を標的とするための方法は3つあります。第1のアプローチは、マウスハイブリドーマクローンを作製し、次に完全IgG (またはIgM)をscFvまたはFabに変換する方法です。第2は、免疫されたファージディスプレイscFvまたはFabマウスライブラリーを作製し、次いでその抗原を用いてライブラリーをスクリーニングするというアプローチです。第3の方法は、scFvまたはFabクローンを直接得るべく、抗原を使用して既製のscFvまたはFab抗体ファージディスプレイライブラリー (通常はヒトの)をスクリーニングすることです。また、ニワトリIgYをscFvまたはFab断片に変換することもできます。

scFv/Fab Construction

Fabフラグメントは可変ドメインおよび定常領域の両方を含むため、scFvとは異なり、その構築および最終的な発現はより複雑ですが、多くの実績を有するCreative Biolabs社により、scFv構築に使用される同じ重鎖および軽鎖可変鎖をFabの構築に使用することができます。

モノクローナル抗体が利用可能である場合、Fab断片は酵素的に作製することができます。
パパインは、ヒンジ部で免疫グロブリンG分子を切断するエンドペプチダーゼ活性を有するシステインプロテアーゼ酵素です。この切断により、3つの50kDa以下のフラグメント (2つのFabドメインと1つのFcドメイン)が生成されます。パパイン消化抗体は、凝集、沈殿、オプソニン化、および溶解を促進することができません。固定されたパパインは、消化後にパパイン酵素を除去する必要なしにFabおよびFcフラグメントを生成するという利点を有します。


Expression strategies:

  • E. coliのペリプラズムにおける分泌発現。
  • E. coliの細胞質における可溶性発現。
  • 封入体としての不溶性発現。
  • SUMOフュージョンプラットフォーム。

Purification strategies:

  • アフィニティータグ:ヘキサヒスチジン (His6)タグ。
  • 分子フォーマット:His6タグと目的タンパク質 (POI)との間にSUMOを挿入。
  • 精製:IMAC (Immobilized Metal Affinity Chromatography 固定化金属アフィニティークロマトグラフィー)。
  • 精製後のタグ除去:SUMOプロテアーゼを用いたSUMOのC末端での切断。

scFv構築の具体例

ハイブリドーマセルラインのシーケンシングから発現ベクター構築
例1) scFv製造 – ハイブリドーマセルラインのシーケンシングからの発現ベクターまで
以下の価格はすべて参考価格です。ライセンス事案の場合等、都度見積もりをお出しいたします。

  1. Vh and Vl sequencing from hybridoma cell line
    We charge 350,000円 to sequence the Vh and Vl region from hybridoma cell line.
  2. Construction of the scFv expression construct
    We charge 205,000円/ea to construct an expression vector for the scFv antibody, covering below process:

    • Gene synthesis plus codon optimization, there are two genes, Vh and Vl, 3,000円/ea, 58,000円 in total
    • Design and construct the scFv construct. Please note that there are two different orientations for one scFv antibody as below. It’s hard to predict which one works better. And it’s even possible that one orientation is no longer functional. We highly recommend to try both orientations. For each orientation construct, the price is 73,000円.
      • N’-Vh-linker-Vl-C’
      • N’-Vl-linker-Vh-N’
    • Clone the scFv construct into the expression vector. Validate the gene by DNA sequencing. 80,000円/ea.

In summary, if you want to get both scFv constructs with different orientations, the sum is 350,000円. We just charge for the gene synthesis for once. If you want just one scFv construct, please assign the orientation and your price is 205,000円.


下記リンク先はメーカーページです。

Services:
Thermal Stable scFv/Fab Screening
scFv/Fab Production
Fab PEGylation
Bivalent and Bispecific ScFv/Fab
Bispecific T Cell Engager (BiTE)
Fab-scFv Fusion Protein (Tribody)
Products:
Fab Fragment Antibodies
scFv Fragment Antibodies
Bispecific T Cell Engager (BiTE) Antibodies


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