scFv/Fabの構築

Creative Biolabs社は、scFvおよびFab構築のための強固なプラットフォームを確立。
scFvまたはFabが特異的な抗原を標的とするための方法は3つあります。

第1のアプローチは、マウスハイブリドーマクローンを作製し、次に完全IgG (またはIgM)をscFvまたはFabに変換する方法です。
第2は、免疫されたファージディスプレイscFvまたはFabマウスライブラリーを作製し、次いでその抗原を用いてライブラリーをスクリーニングするというアプローチです。
第3の方法は、scFvまたはFabクローンを直接得るべく、抗原を使用して既製のscFvまたはFab抗体ファージディスプレイライブラリー (通常はヒトの)をスクリーニングすることです。

また、ニワトリIgYをscFvまたはFab断片に変換することもできます。

scFv/Fab Construction

Fabフラグメントは可変ドメインおよび定常領域の両方を含むため、scFvとは異なり、その構築および最終的な発現はより複雑ですが、多くの実績を有するCreative Biolabs社により、scFv構築に使用される同じ重鎖および軽鎖可変鎖をFabの構築に使用することができます。

モノクローナル抗体が利用可能である場合、Fab断片は酵素的に作製することができます。

パパインは、ヒンジ部で免疫グロブリンG分子を切断するエンドペプチダーゼ活性を有するシステインプロテアーゼ酵素です。この切断により、3つの50kDa以下のフラグメント (2つのFabドメインと1つのFcドメイン)が生成されます。パパイン消化抗体は、凝集、沈殿、オプソニン化、および溶解を促進することができません。固定されたパパインは、消化後にパパイン酵素を除去する必要なしにFabおよびFcフラグメントを生成するという利点を有します。

Expression strategies:

E. coliのペリプラズムにおける分泌発現。
E. coliの細胞質における可溶性発現。
封入体としての不溶性発現。
SUMOフュージョンプラットフォーム。

Purification strategies:

アフィニティータグ：ヘキサヒスチジン (His6)タグ。
分子フォーマット：His6タグと目的タンパク質 (POI)との間にSUMOを挿入。
精製：IMAC (Immobilized Metal Affinity Chromatography 固定化金属アフィニティークロマトグラフィー)。
精製後のタグ除去：SUMOプロテアーゼを用いたSUMOのC末端での切断。

scFv構築の具体例

ハイブリドーマセルラインのシーケンシングから発現ベクター構築

scFv製造例 – ハイブリドーマセルラインのシーケンシングからの発現ベクターまで

ライセンス事案の場合等、都度見積もりをお出しいたします。

ハイブリドーマ細胞株からのVhおよびVl配列決定
scFv発現コンストラクトの構築 (scFv抗体の発現ベクターを構築)
以下のプロセスも含みます。
- 遺伝子合成とコドン最適化には、VhとVlの2つの遺伝子があります。
- scFvコンストラクトの設計および構築：以下のように、1つのscFv抗体には2つの異なる方向があります。どちらがうまく機能するかを予測するのは困難です。1つのオリエンテーションがもはや機能しなくなっている可能性もあります。従って、両方のオリエンテーションを試すことを強くお勧めします。
  - N’-Vh-linker-Vl-C’
  - N’-Vl-linker-Vh-N’
- scFv構築物を発現ベクターにクローニング：DNAシーケンスによって遺伝子を検証します。

その都度メーカーに見積もりを取った上でご案内いたしますのでお気軽にお問い合わせください。

ファージディスプレイ関連ページ
カスタム抗体作製受託サービス
- 一例: ポリクローナル抗体作製

下記リンク先はメーカーページです。

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