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ファージディスプレイによるライブラリーの構築

Creative Biolabs社による様々なファージディスプレイシステムの下でカスタマイズされたライブラリ構築サービスを提供いたします。同社は、ライブラリー構築に豊富な経験を持ち、化合物骨格 (scaffold)ライブラリー、ペプチドライブラリー、抗体ライブラリー、cDNAライブラリーなど、さまざまな種類のファージディスプレイライブラリーを作製する専門家集団です。

抗体ライブラリー (Immune, Naïve, Semi-synthetic, Synthetic)

高品質な抗体ライブラリを構築するためにscFvまたはFab形式で目的の抗体を表示することができます。scFvはFabよりサイズが小さいため、scFvライブラリーはFabライブラリーよりも遺伝的により安定ですが、Fabライブラリーは、選択や特徴付けを単純化する二量体および三量体などのより高分子量の種を形成する傾向がありません。さらに、抗体ライブラリー構築サービスのレパートリー源として、ナイーブまたは免疫動物由来のヒト形質細胞および脾臓細胞の両方の受け入れが可能です。また、Creative Biolabsは完全または半合成の抗体ライブラリーも作製することができます。

詳細 (Immune Antibody Library Services)

Antibody Library (Immune, Naïve, Semi-synthetic, Synthetic)

スキャフォールド (骨格)ライブラリー

化合物骨格 (scaffold)の包括的なリストのための高品質ファージディスプレイライブラリを生成することができます。お客様の要求に基づいて特定の化合物骨格 (scaffold)を設計するためのカスタマイズされたサービスを提供。さらに、100%の正確な突然変異体および10¹⁰を超える多様性を達成するために、三量体コドン技術およびNNK法の両方がライブラリー構築に用いられ、その結果、ランダム性が高まり、ライブラリーを高親和性タンパク質またはペプチドの標的の選別･単離により適しております。

詳細 (Scaffold library construction service)

phage, ligand, receptor and cell

ペプチドライブラリー (Naïve, Semi-synthetic)

ペプチドライブラリーの形成においては、ナイーブおよび半合成ペプチドの両方に対して標的に適合な架橋を有する拘束のような (constrained)構造を生成することができます。この構造は、安定性、透過性、結合親和性、プロテアーゼ活性に対する耐性、などの一連のペプチドの特性を維持または増加させるのに寄与します。さらに、8-mer (および30-merまで)より長い挿入を有するペプチドライブラリーについては、3つのヌクレオチドドーピング戦略 (NNK ･スプリットミックススプリット合成･トリマーコドン)を採用して、挿入されたDNA配列にコードされるアミノ酸配列を最大化します。

詳細 (Peptide library construction service)

ファージディスプレイによらないペプチドライブラリー作製

cDNAライブラリー

適切なファージシステムの表面上にcDNA産物全体を表示することもできます。従来のcDNAライブラリーと比較して、同社の高品質ライブラリーは、より高い容量、密度、正しい方向性で、多くのタンパク質候補の研究にさらに貢献します。さらに、標準ライブラリー、全長ライブラリー、正規化(ノーマライズ)ライブラリー、サブトラクティブライブラリーなど、さまざまな種類のcDNAライブラリーがあり、お客様のニーズに合わせてカスタマイズできます。

詳細 (cDNA library construction service)

半合成/全合成ライブラリの多様性

Creative Biolabs社は通常、適切な多様性を備えた半合成または完全合成ライブラリを設計する3つの主なアプローチを採用しています。通常、10⁸の多様性を持つライブラリを生成しますが、10¹⁰を超えるライブラリを生成することも、またはお客様の特定の要件に従うこともできます。

Hard randomization: complete diversity is introduced by using degenerate codons encoding all twenty natural amino acids.
Tailored randomization: incomplete or biased diversity is introduced by using degenerate codons encoding a subset of natural amino acids.
Diversification: degenerate codons are synthesized using trimer phosphoramidites corresponding to 20 natural amino acids, which exclude stop codons.

ファージディスプレイシステムの選択肢

ファージ各種
目的タンパク質と特定のプロジェクト目的に基づいて、ライブラリー構築に最適なファージディスプレイシステム (M13、T4、T7)を調整することができます。

Table 1. Different phage display vehicles and their characteristics (Ebrahimizadeh and Rajabibazl 2014)
	M13	T4	T7
ゲノムサイズ	6407 bp	168895 bp	39937 bp
ディスプレイタンパク質	All coat proteins, usually pIII and pVIII	SOC and HOC	gp10B
ディスプレイサイズ	>110 kDa on pIII <10 kDa on pVIII	<710 kDa	<132 kDa
ディスプレイ密度	<5 copies on pIII <2700 copies on pVIII	<810 copies on SOC <155 copies on HOC	<415 copies
ライフサイクル	Non-lytic	Lytic	Lytic

λファージ

通常のM13、T7、T4ファージに加えて、ラムダファージは、その単純な構造および柔軟なDNAによりDNAフラグメントを運ぶのに理想的な媒体です。複数のラムダベクターを使用することにより、ゲノムDNA、染色体または微生物のいずれかから95%以上をカバーするゲノムライブラリーを生成するために、特定のゲノムライブラリー構築サービスを提供することができます。さらに、代替サービスとして、ラムダベースのcDNAライブラリー生成を提供することも可能です。

シングルドメイン抗体 (ナノボディ)ライブラリーの作製

ファージディスプレイによるラマ/ラクダVHH抗体ライブラリーの作製[size: n×10⁸]

サービス内容	数量	期間
動物免疫	1	2-3 months
リンパ球分離、RNA回収およびcDNA合成	TDB	1 week
PCR増幅 (VHH遺伝子の増幅)	Multiple	1 week
ファージミドベクターへのライゲーションおよび形質転換	1	2 weeks
ライブラリー検証	1	1 week

料金についてはその都度メーカーに見積もりを取ります。お気軽にお問い合わせください。
ファージミドベクターpCDisplay-2を使用 (下記)。エレクトロポレーションによって大腸菌TG1に形質転換。
M13K07をヘルパーファージとして使用
各ステップで必要な費用の80%を、そのステップ開始時点でお支払頂きます (返金不可)。残りの20%に関しては成功報酬です。

pCDisplay-2 vector
Cat.No.: VPT4021
Vector type: phargemid vector
Vector length: 4612bp
Host: TG1
Tag: His6,Myc
Promotor: M13,ColE
Resistance: Amp

◆免疫スケジュール

INJECTIONS	Inject 1mg CFA	Day: 0
	Inject 1mg IFA	Day: 21
	Inject 1mg CFA	Day: 42
	Inject 1mg IFA	Day: 63
BLEEDS	Pre Bleed	Day: 0
	Test Bleed	Day: 52
	Production Bleed	Day: 73
	PI to determine continuation of project	Day: 84

一例: ポリクローナル抗体作製

ファージディスプレイによるライブラリー構築に関連するページ

下記リンク先はメーカーページです。

Antibody Humanization | Magic™ Human Antibody Production by Phage Display Immune Library | High-Affi™ Human Antibody Discovery | Antibody Production by DNA Immunization

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